Identificação de bactérias - Catalase e Coagulase

Provas para identificação de bactérias

CATALASE E COAGULASE

CATALASE

PRINCÍPIO:
A catalase é uma enzima que decompõe o peróxido de hidrogênio (H2O2) em água e oxigênio.

UTILIDADE:
Para Staphylococcus, Streptococcus, Enterococcus, Listeria, Corynebacterium, Micrococcus, Bacillus, Moraxella catarrhalis.

INOCULAÇÃO:

§  Colocar uma gota de peróxido de hidrogênio (água oxigenada) 3% sobre uma lâmina em um tubo;

§  Com auxílio de fio bacteriológico, agregar a colônia em estudo na gota de peróxido de hidrogênio.

INTERPRETAÇÃO
+ Positivo: Presença imediata de bolhas - a produção de efervescência indica a conversão do H2O2 em água e oxigênio gasoso.
- Negativo: Ausência de bolhas ou efervescência.

COAGULASE

PRINCÍPIO: Verificar a capacidade de microrganismos reagirem com o plasma e formarem um coágulo, uma vez que a coagulase é uma proteína com atividade similar à protombrina, capaz de converter o fibrinogênio em fibrina, que resulta na formação de um coágulo visível. ƒ Pode ser encontrada em duas formas que possuem diferentes propriedades: coagulase conjugada e coagulase livre.

A coagulase conjugada (prova em lâmina): é também conhecida como fator de aglutinação, encontra-se unida à parede celular bacteriana e não está presente em filtrados de cultivos. Quando as células bacterianas são suspensas em plasma (fibrinogênio), formam-se cordões de fibrina entre elas, o que causa agrupamento sob a forma de grumos visíveis.

A coagulase livre (prova em tubo): é uma substância similar à trombina e está presente em filtrados de cultivos. É secretada extracelularmente e reage com uma substância presente no plasma denominado Fator de Reação com a Coagulase – CRF, para formar um complexo que, por sua vez, reage com fibrinogênio, formando fibrina (coágulos). Quando uma suspensão em plasma do microrganismo produtor de coagulase é preparada em tubo de ensaio, forma-se um coágulo visível após o período de incubação.

UTILIDADE
Separar as espécies de Staphylococcus de importância clínica,  S. aureus – coagulase positiva, das
demais espécies – coagulase negativa.

INOCULAÇÃO

    Coagulase conjugada:

§  Traçar dois círculos com lápis de cera em uma lâmina de vidro;

§  Colocar duas gotas de água destilada ou solução fisiológica estéreis dentro de cada círculo;

§  Com auxílio de um fio bacteriológico agregar a colônia em estudo, homogeneizando delicadamente em cada círculo;

§  Colocar uma gota de plasma para a prova de coagulase  em um dos círculos;

§  No outro círculo, adicionar outra gota de água destilada ou solução fisiológica estéreis, como controle;

§  Homogeneizar com palito de madeira;

§  Inclinar a lâmina delicadamente, para frente e para trás;

§  Observar presença de aglutinação.


Coagulase livre:

§  Com auxílio do fio bacteriológico,  suspender colônias em estudo em caldo BHI  e colocar em estufa à 37ºC até que turve;

§  Se necessário, acertar a turbidez até 0,5 da escala de MacFarland;

§  Em um tubo de ensaio estéril, colocar 0,5 ml de plasma reconstituído e 0,5 ml do caldo BHI com crescimento bacteriano recém turvado;

§  Incubar em estufa à 35ºC 4 horas;

§  Verificar se há presença de coágulo;

§  Se não houver presença de coágulo, incubar o tubo em temperatura ambiente e repetir as leituras com 18 e 24 horas de incubação.

INTERPRETAÇÃO

Coagulase conjugada:
+ Positiva: formação de precipitado branco e aglutinação dos microrganismos da suspensão, após 15 segundos, no círculo que contém o plasma.
- Negativa: ausência de aglutinação no círculo que contém o plasma.

A presença de precipitado ou aglutinação, torna a prova inespecífica, devendo ser repetida a prova em tubo.

Coagulase livre:
+ Positiva: presença de qualquer grau de coágulo.
- Negativa: ausência de coágulo.

Fonte: Biomedicina Padrão, por Bruno Câmara.